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鵝細小病毒PCR檢測試劑盒說明書上海聯祖生物相關產品:OIT3檢測試劑盒洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
產品分類
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 鵝細小病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7567 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
(R)-(-)-1,2-Propanediol3-乙炔 97%鹽酸標準溶液 0.2000mol/L(0.2N)
(S)-(+)-1,2-Propanediol炔酸乙酯 99%鹽酸標準溶液 0.1000mol/L(0.1N)
Guar gum2-乙炔噻吩 97%鹽酸溶液 6mol/L(6N)
Xanthan gum3-乙炔苯胺 98%鐵標準溶液 1000μ/ml
6-Azauridine*基硅乙酸乙酯 97%鐵標準溶液 100μ/ml
Piperazine乙氧基乙炔,己烷溶液 40 wt%己烷溶液標準溶液 0.05000mol/L (0.1N)
8-Hydroxyquinaldine4-乙炔基吡啶鹽酸鹽 97%鉛標準溶液 1000mg/L,溶劑:1%硝酸
Hydantoin2-乙炔苯 98%鉛標準溶液 100μg/ml
Lalin4-氟苯酸 99%硝標準溶液 0.005000mol/L(0.01N)()
Kieselguhr三氟甲磺鎵 98%硝酸鎳標準溶液 0.01000mol/L(0.01M)
Celite 5451-庚炔 97%鎳標準溶液 1000μg/ml
Acrylyl chloride1-己炔-3- 96%鎳標準溶液 100μg/ml
Diethyl malonate6-羥基喹啉 98%氯化溶液 3.3mol/L(3.3N)
Diacetone alcohol氫化奎寧定 96%氯化溶液 3mol/L(3N)
MMA氫化奎寧 95%重鉻酸標準溶液 1/24mol/L(0.25N)
GMA1,6-庚二炔 91%重鉻酸標準溶液 1/60mol/L(0.1N)
4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>97.0%(GC)(T))Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjugate)IL-6 白介素6抗體
4-(2-氯乙酰氨基)-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>96.0%(HPLC))Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)IL-6 白介素6
4-基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>95.0%(T))Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (PE Conjugate)IL-6 白介素6
16-DOXYL-硬脂酸自由基(>95.0%(HPLC)(T))Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser664) (D3B9Z) Rabbit mAbIL5RA/CD125 白介素-5受體α鏈抗體IL-5Rα
4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC))Pan-Cadherin (28E12) Rabbit mAbIL-5 白細胞介素5抗體
4-羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基苯甲酸鹽自由基(>97.0%(GC))Pan-Cadherin (28E12) Rabbit mAbIL-4R/CD124 白細胞介素4受體抗體IL-4Rα
4-異硫酰基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>97.0%(GC)(T))Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjugate)IL-4I1 白細胞介素4誘導蛋白1抗體
4-(2-代乙酰氨基)-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>98.0%(HPLC))Phospho-CASC5 (Thr943/Thr1155) (D8D4N) Rabbit mAbIL-4 (human) 白介素4抗體(人)
4-甲氧基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC)(T))Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)IL-4 白介素4抗體
4-甲基烯酰氧-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧自由基(>98.0%(GC)(T))GEF-H1 (55B6) Rabbit mAbIL-3R alpha/CD123 白介素3受體a鏈抗體
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