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產品名稱 | 多瘤病毒PCR檢測試劑盒價格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7565 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Boron carbide5-氯-1-戊炔 98%氟酸 49.5-50.5%溶液
Boron oxide3-氯苯乙炔 97%L-氨酰-L-谷胺酰胺 98%
Glass Fiber2-氯-6-甲氧基吡啶 97%N-氯代琥珀酰亞胺 98%
Quinacrine dihydrochloride氯甲基*基硅烷 98%肌酸,一 BR
2-Amifluorene6-氯-1-己烯 97%無肌酸 98%
2-Amipyrimidine2,5-二溴吡啶 99%肌酐 99%
5-Nitrouracil2,6-二溴吡啶 98%N,N-二甲基甘氨酸鹽酸鹽 99%
Antipyrine1,4-二乙炔基苯 97%三 AR,99.5%
Vaselineoil4,4'-二甲基-2,2'-聯吡啶 98%N-月桂酰肌氨酸鈉 98%
VaselineoilN,N'-二甲基乙二胺 96%萘甲唑啉鹽酸鹽 99%
Arlacel A1,8-二溴辛烷 98%鈀標準溶液 1000μg/ml,溶劑:2.0 mol/L HCl
Benzil2(2-吡啶)酮 98%鈀標準溶液 100μg/ml
Chrysene2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶 98%氯化鋇溶液 1mol/L(2N)
Diphenylacetylene酮基膦酸二乙酯 96%溴標準溶液 0.05000mol/L(0.1N)
Euparal1,4-二氯酞 98%硫酸鈰標準溶液 0.1000mol/L90.1N
Indan2,2'-聯吡啶 AR,99.0%銅標準溶液 1000μg/ml
2-氨基苯甲酰胺(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Drosophila Akt (Ser505) AntibodyIMP3/IGF-IIBP3 胰島素樣生長因子2 mRNA 結合蛋白3抗體
羧氧基胺半鹽酸鹽(>98.0%(T))THEX1 (D66A11) Rabbit mAbILVBL 乙酰乳酸合成酶蛋白抗體
2-氟-1-甲基吡啶鎓對甲苯磺酸鹽(>98.0%(T))Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAbILT2/CD85j 細胞表面免疫球蛋白樣轉錄因子2抗體
1-(5-氟-2,4-二基)-4-甲基哌(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAbILP2 抑制細胞凋亡樣蛋白2抗體
吉拉德試劑 P(>95.0%(T))Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAbILK-1 整合素連接激酶-1抗體
2-肼基吡啶(>98.0%(GC)(T))Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAbILDR1 免疫球蛋白樣結構域受體1抗體
2-肼鹽酸鹽(>98.0%(T))Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAbIL-9 白介素9抗體
4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量:23.50-24.30 %)Akt3 AntibodyIL-9 白介素9抗體
4-[3,5-二甲基-4-(4-硝基芐氧基)苯基]-4-氧代丁酸琥珀酰亞胺酯(>96.0%(HPLC))CT3 (D4K4N) Rabbit mAbIL-8/CXCL8 白介素8抗體
異酸對甲苯磺酰酯(>95.0%(T))Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAbIL-8/CXCL8 白介素8抗體
多瘤病毒PCR檢測試劑盒價格B淋巴細胞生發中心相關蛋白抗體Ergosterol glucoside中文名:麥角甾醇葡萄糖苷別名:分子式:C34H54O6
半乳糖凝集素7抗體Phyperulide E中文名:別名:分子式:C28H40O9
腸高血糖素相關肽抗體Withalide C中文名:醉茄內酯C別名:分子式:C28H39ClO7
半乳糖凝集素8抗體Physapruin A中文名:別名:分子式:C28H38O7
半乳糖凝集素1抗體4β-Hydroxywithalide E中文名:4β-羥基醉茄內酯E別名:分子式:C28H38O8
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。