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粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒MEK1/MAPKK1/MEKK1 MEK1/MAPKK1(N-端)20 ulES1蛋白同系物,線粒體(C21orf33/HES1/KNPI)ELISA試劑盒Menin/Men1 Menin抑癌蛋白100 ulEphrin-B2(EFNB2)ELISA試劑盒Metal ion transporr 擬南介金屬離子轉運蛋白
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒價格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7829 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
二(AR,99.5%,含50-150ppm異戊穩定劑)β-Amyloid Antibody對甲酰基甲酸甲酯
二(for GC,≥99.8%,含50-150ppm戊穩定劑)Rad23A (D7U7Z) Rabbit mAb2-氨基-5-溴-硝基三氟甲
二(ACS ,≥99.5%)PSMA2 Antibody1-Cbz-氨甲基哌啶
二甲基亞砜(AR,>99%(GC))PSMA3 Antibody2,5-二溴-氟吡啶
二甲基亞砜(>99.8%(GC))PSMA5 (K231) Antibody9-溴蒽
二甲基亞砜(分子生物學,≥99.9%)Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (PerCP-Cy5.5® Conjuga)呋喃酚
二甲基亞砜(多肽合成)PSMA5 (T14) Antibody5-溴-2-
二甲基亞砜(藥用級)PhosphoPlus®DARPP-32 (Thr34) Antibody Duet1H-吲唑-5-
甲(AR,99.5%)PSMA6 Antibody1,2-二甲基-5-羥基-吲哚甲酸酯
甲(無水級,99.8%)AMPA Receptor (GluA2/3/4) Antibody5--2-噻吩叔丁基磺酰
甲(≥99.9%(GC))Phospho-Rac1/cdc42 (Ser71) Antibody2--羥基-5-氟嘧啶
甲(ACS)Phospho-Rac1/cdc42 (Ser71) Antibody氟-2-羥基吡啶
甲(色譜級+, ≥99.9%)Cdc42 Antibody溴-2-甲
甲(蛋白測序級,≥99.9%)Puma (D7L9L) Rabbit mAb (Rodent Specific)(R)-(+)-環氧烷
甲(用于揮發性有機物的GC/MS分析, ≥99.9%)VEGF-B Antibody環磺酰
(95%) (AR,95.0%)PTCH2 (L849) Antibody1,2-二氨基-3,二氟
(95%) (for HPLC)Rac1/2/3 Antibody2--吡啶
(95%) (GR,95.0%)Rac1/2/3 Antibody2-氟-基-吡啶
E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒Melan-A/MART-1/Melanoma HMB45 黑色素瘤相關抗原/黑色素-A100 ul
E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒MEK1/MAPKK1/MEKK1 MEK1/MAPKK1(N-端)20 ul
ES1蛋白同系物,線粒體(C21orf33/HES1/KNPI)ELISA試劑盒Menin/Men1 Menin抑癌蛋白100 ul
Ephrin-B2(EFNB2)ELISA試劑盒Metal ion transporr 擬南介金屬離子轉運蛋白100 ul
EJ/抗甘氨酰tRNA合成酶(EJ/GlyRS)ELISA試劑盒Mfn1 線粒體融合蛋白120 ul
Egl九同源物1(EGLN1/C1orf12/PNAS-118/PNAS-137)ELISA試劑盒MGMT O6甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶100µl
EB病毒早期抗原(EBEA)(IgG)ELISA試劑盒Metallothionein 金屬硫蛋白100 ul
EB病毒衣殼抗原(EBVCA)(IgM)ELISA試劑盒LAMR1 層粘連蛋白受體1(N端)100 ul
EB病毒衣殼抗原(EBVCA)(IgG)ELISA試劑盒MTA1 腫瘤轉移相關蛋白1100 ul
偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒價格9號染色體開放閱讀框91抗體Quercitrin中文名:槲皮苷別名:Quercetin 3-O-rhamside分子式:C21H20O11
9號染色體開放閱讀框93抗體Tectoridin中文名:鳶尾苷別名:射干苷分子式:C22H22O11
9號染色體開放閱讀框96抗體Leachiane A中文名:里查酮A別名:分子式:C26H30O6
9號染色體開放閱讀框98抗體5,7-Diacetoxy-3,8,4'-trimethoxyflavone中文名:別名:分子式:C22H20O9
CD39抗體Picembrin 7-acetate中文名:別名:分子式:C17H14O5