組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
三標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=5%)Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb1-(BROMOPHENYLSULFONYL)PIPERAZINE

三標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)Calponin 1 (D8L2T) XP® Rabbit mAb(1R,2R,5R)-(+)-2-羥基-蒎烷酮

唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Calponin 1 (D8L2T) XP® Rabbit mAb碳酸芐基酯

2,6-二氟甲酸(標(biāo)準(zhǔn)品)PTMScan® Propionyl-Lysine [Prop-K] Kit氨基-5-溴甲鹽酸鹽

二Standard for GC,≥99.5%(GC)CD3 (17A2) Rat mAb (APC-Cy7® Conjuga)BROMO-5-(PYRROLIDINOCARBONYL)PYRIDINE

二(標(biāo)準(zhǔn)品)EOMES (D8D1R) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-氨基-基-1-基-1H-吡唑-甲酸酯

二(標(biāo)準(zhǔn)品)RBM10 Antibody2-氟-5-異氧基基酸

十氫萘(標(biāo)準(zhǔn)品)p53 (DO-1) Mouse mAb1-BOC-氨基-2,2-二甲基1,烷二

二二(標(biāo)準(zhǔn)品)Mutant Ras Antibody Sampler Kit靛青三磺酸鹽

二二(Standard for GC,≥99.5%(GC))PathScan® Total Bmi1 Sandwich ELISA Kit氟-(哌啶-1-羰基)基酸

草酸二酯(標(biāo)準(zhǔn)品)RPL11 (D1P5N) Rabbit mAb基甲酰

二(標(biāo)準(zhǔn)品)BRCC36 (D5E5H) Rabbit mAbPICOLINE-BORONIC ACID HCL

1,2-二(標(biāo)準(zhǔn)品)Alix (E4T7U) Rabbit mAb-D-氨酸

鄰二甲酸二異壬酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Acetyl-α-Tubulin (Lys40) (D20G3) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)對(duì)叔丁基磺酰

4,二溴聯(lián)(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb酸(1S,2S)-N,N'-雙[(R)-2-羥基-2'-基-1,1'-聯(lián)萘基-基亞甲基]-1,2-二基二合錳(III)

1,1-二標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml,基體：甲)Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb6-氨基-2-萘甲酸甲酯

2，二肼(AR,≥99.0% (HPLC))Nav1.1 (D8X1Y) Rabbit mAb2-甲酰氨基酸

2，二肼(~0.005 M in ethanol,for TLC)HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb溴-2-氧基-5-氟基酸

白三D4(LTD4)ELISA試劑盒Ingrin Alpha V + Beta1  整合素αVβ1100 ul

白三C4(LTC4)ELISA試劑盒Ingrin Alpha V + Beta 3  整合素αVβ31 Kit

白三B4(LTB4)ELISA試劑盒Ingrin Alpha V + Beta 5   整合素αVβ51 Kit

白介素增強(qiáng)子結(jié)合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)ELISA試劑盒Ingrin alpha E/CD103  整合素αE100 ul

白介素8(IL-8/CXCL8)自身ELISA試劑盒IQGAP1  支架蛋白100 ul

白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒IRF-1  干擾素調(diào)節(jié)因子1100 ul

白介素7(IL-7)ELISA試劑盒IRAK  白介素-1受體相關(guān)激酶1/220 ul

白介素6受體(IL-6R)ELISA試劑盒Phospho-IRAK1 (Ser376)  酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1100 ul

白介素6(IL-6)ELISA試劑盒Phospho-IRAK1 (Thr209)  酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1100 ul
人遺傳小腦共濟(jì)失調(diào)PCR檢測(cè)試劑盒廠家橋粒糖蛋白4抗體Pazopanib中文名：帕唑帕尼別名：分子式：C21H23N7O2S

中間絲蛋白β-synemin抗體Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate中文名：卡培他濱別名：分子式：C16H20FN3O7

MAP激酶激活死亡域蛋白4C抗體Irbesartan中文名：厄貝沙坦別名：分子式：C25H28N6O

腫瘤細(xì)胞調(diào)亡素/腫瘤壞死因子受體死亡受體6抗體Isoniazid中文名：別名：分子式：C6H7N3O

Erdj5/DNAJC10蛋白抗體Decoquinate中文名：癸氧喹酯別名：分子式：C24H355