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尼洛替星別名:24,25-Epoxy-23-hydroxytirucall-7-en-3-one分子式:C30H48O3視神經細胞相關蛋白/早老素結合蛋白抗體Simiarel中文名:西米杜鵑醇別名:5-Adianen-3-ol分子式:C30H50O胞質分裂專一蛋白7抗體Ursolic acid中文名:熊果酸別名:3-Hydroxy-12-ursen-28-oic acid;烏蘇酸分子式:C
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 犬細小病毒PCR檢測試劑盒價格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7745 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
環己烷(色譜級)OLFM4 (D1E4M) XP® Rabbit mAb2-基-3,5-二氟吡啶
二硫化碳(色譜級)Phospho-CDK Substra [pTPXK] (D9V5N) Rabbit mAb4,6-二甲氧基-2-(氧基羰基)氨基嘧啶
四化碳(色譜級)KPNA2 Antibody9,9-二[(羥氧基)基]芴
二甲基亞砜(色譜級)Gα(q) (D5V1B) Rabbit mAb3,二氫異喹啉-1(2H)-酮
N,N-二甲基酰(色譜級)Phospho-MAPK Substras Motif [PXpTP] MultiMab™ Rabbit mAb mix2-溴-1-(2,6-二)酮
鄰二 ;1,2-二(色譜級)Torin 1(甲基)甲酸
二(色譜級)Pan Na Channel α Subunit (D2I9C) Rabbit mAb氧酸鈉
二二二(色譜級)M-RIP (D9I5T) Rabbit mAb二二二甲基酸酯
二丁(色譜級)Torin 2基-1,磺酸內酯
(色譜級)FTO Antibody2--甲基-硝基吡啶
甲酸(色譜級)Phospho-Ser-Pro-Pro Motif [pSPP] Rabbit mAb2-氟-5-(三氟甲基)甲酰
正己烷(色譜級)SignalSilence® OSR1 siRNA I1,1-二溴-3,3,三氟酮
正庚烷(色譜級)PSMC2 (D5T1T) Rabbit mAb3,5-二甲酸甲酯
異辛烷(色譜級)M-RIP (D8G8R) Rabbit mAb5,6-二甲氧基-2-(吡啶基)亞甲基-1-茚酮
異(色譜級)Eg5 (E1L3W) Rabbit mAb3,5-吡啶二甲酸二酯
異(色譜級)NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1-甲基-1H-咪唑-2-甲
二甲(色譜級)Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control (Pacific Blue™ Conjuga)肉桂基
異丁(色譜級)Ras (G12V Mutant Specific) (D2H12) Rabbit mAbN-基異基
凋亡抑制因子3(BIRC4/API3)ELISA試劑盒T7 tag T7 tag標簽100 ul
凋亡相關蛋白激酶(DAPK)ELISA試劑盒V5 tag V5 tag標簽100 ul
凋亡相關半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA試劑盒KT3 tag KT3 tag100 ul
凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)ELISA試劑盒VSV-G tag VSV-G tag標簽100 ul
淀粉狀蛋白β(A4)前體蛋白結合家族B成員1(FE65)ELISA試劑盒HIV gp120 艾滋病病毒100 ul
電子轉運黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉運黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)ELISA試劑盒HIV gp41 艾滋病病毒100 ul
電子轉移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA試劑盒HIV-1 ENV(gp160) 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白20 ul
電壓門控通道(VGKC-ab)ELISA試劑盒HIV-1 ENV (gp160) 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白100 ul
電壓門控通道(VGKC)ELISA試劑盒HLA-DR HLA-DR100 ul
犬細小病毒PCR檢測試劑盒價格DHX螺旋酶抗體Lycoclaval中文名:別名:14-Serratene-3,21,24-triol分子式:C30H50O3
肌營養蛋白α抗體Niloticin中文名:尼洛替星別名:24,25-Epoxy-23-hydroxytirucall-7-en-3-one分子式:C30H48O3
視神經細胞相關蛋白/早老素結合蛋白抗體Simiarel中文名:西米杜鵑醇別名:5-Adianen-3-ol分子式:C30H50O
胞質分裂專一蛋白7抗體Ursolic acid中文名:熊果酸別名:3-Hydroxy-12-ursen-28-oic acid;烏蘇酸分子式:C30H48O3
環指蛋白19抗體3β-Acetoxyurs-11-en-28,13β-olide中文名:別名:分子式:C32H48O4