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溴吲哚-酸反環鹽酸鹽;單氧化酶(MAO)抑制劑Histone H4 (D2X4V) Rabbit mAb氟-甲氧基甲酸黃酸(>96.5%,BS)PSMC3/TBP1 Antibody二羥茶40%氟酸水溶液(39.0~41.0%,BC)ATR (E1S3S) Rabbit mAb對氟
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 禽呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7731 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
DMSPlac8 (E1J2Z) Rabbit mAb5-氟-2-三氟甲
D-正亮氨酸(>99%,BC)Galectin-1/LGALS1 (D608T) Rabbit mAb (IHC Formulad)羰基-3,二氫-2H-1,并噻-6-羧酸甲酯
鹽酸多巴PLD2 (E1Y9L) Rabbit mAb (IHC Specific)5-溴-2-
DSIF5 (D5G9) Rabbit mAb1-甲基-1H-吡唑-甲
2'-脫氧尿苷-5'-三酸三鈉鹽Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb2-巰基氧基
四氫甲基嘧啶羧酸(>98%,BR)Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb5--2-氟-吡啶
氧化鎂碳酸鈉合劑SimpleChIP® Mouse PER1 Intron 1 Primers2-氟-甲酸
(>98%,BR)PLD2 (E1Y9G) Rabbit mAb10,10-二甲基蒽酮
L-酸酯(>99%,GC)PathScan® Total BACE Sandwich ELISA Kit胍鹽酸鹽
溴烷(>98%,BR)Phospho-TRAF2 (Ser11) (E2B6L) Rabbit mAb溴氟甲基膦酸二酯
月桂酸酯(>98%,BR)PathScan® Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) Sandwich ELISA Kit2,二溴-1-萘酚
基曙紅(>95%,BS)CAMLG (D5L9J) Rabbit mAb7-甲氧基吲哚
沒食子酸酯eRF1 Antibody溴-5-甲
煙酸酯(>98%,BR)CD45 (D9M8I) XP® Rabbit mAb3,5-二-氟
二茂鐵CD45 (D9M8I) XP® Rabbit mAb5-溴吲哚-酸
反環鹽酸鹽;單氧化酶(MAO)抑制劑Histone H4 (D2X4V) Rabbit mAb氟-甲氧基甲酸
黃酸(>96.5%,BS)PSMC3/TBP1 Antibody二羥茶
40%氟酸水溶液(39.0~41.0%,BC)ATR (E1S3S) Rabbit mAb對氟硫酚
鈣激活中性蛋白酶1(CAPN1)ELISA試劑盒HSA 血清白蛋白100 ul
鈣調素特異(CAM-ab)ELISA試劑盒KCNH1/EAG1 鉀離子通道蛋白EAG1100 ul
鈣調酸酶(CaN)ELISA試劑盒HERG/KCNH2/ERG 特異性鉀離子通道蛋白100 ul
鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒HAVCR1/TIM1 甲型肝炎病毒細胞受體1100 ul
鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)ELISA試劑盒HA tag HA tag標簽100 ul
鈣蛋白酶抑素(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒HA tag HA tag標簽100 ul
鈣蛋白酶2(M/II)大亞基(CAPN2)(CAPN2)ELISA試劑盒HA tag HA tag標簽100 ul
鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA試劑盒HAI-1 肝細胞生長因子激活物抑制劑100 ul
富組蛋白(histatin-5)ELISA試劑盒HBsAg 肝表面抗原(包被)100 ul
禽呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒說明書20號染色體開放閱讀框106抗體1,2,3,7-Tetramethoxyxanthone中文名:1,2,3,7-四甲氧基呫噸酮別名:分子式:C17H16O6
20號染色體開放閱讀框107抗體1,7-Dihydroxy-2,3-dimethoxyxanthone中文名:1,7-二羥基-2,3-二甲氧基呫噸酮別名:分子式:C15H12O6
20號染色體開放閱讀框117抗體1,2,3,6,7-Pentamethoxyxanthone中文名:1,2,3,6,7-五甲氧基呫噸酮別名:分子式:C18H18O7
20號染色體開放閱讀框118抗體1,7-Dimethoxy-2,3-methylenedioxyxanthone中文名:1,7-二甲氧基-2,3-亞甲二氧基呫噸酮別名:分子式:C16H12O6
20號染色體開放閱讀框144抗體1,7-Dihydroxy-2,3-methylenedioxyxanthone中文名:1,7-二羥基-2,3-亞甲二氧基呫噸酮別名:分子式:C14H8O6