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柯薩奇病毒A型PCR檢測試劑盒價格上海聯祖生物相關產品:基色氨酸(標準品)C26H40O8右旋樟腦-10-磺酰組C8H8O3-T 三水合物組(標準品)C32H44N2O8溴-卡巴拉汀C32H44N2O8.HBr2-甲基咪唑啉鹽酸鹽液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 柯薩奇病毒A型PCR檢測試劑盒價格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7641 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
ADP; 5'-二酸腺苷/腺苷-5'-二酸C20H19NO5甲基-2-戊基-1,二氧戊環
沙格列汀/沙克列汀C9H8O檸檬酸鐵水合物
更昔洛韋C54H88O232-羥基-甲基-5-溴吡啶
更昔洛韋(標準品)C19H12O7肼基吡啶
5,6-二甲基-1-茚酮C16H19NO4全氟辛基磺酸四基銨
芍藥苷(標準品)C9H6O4
芍藥苷(40%)C22H20N2O5四(二甲氨基)鈦(IV)
芍藥苷(50%)C22H20N2O45--2,二氟吡啶
芍藥苷(90%)C17H16O5聚[二酰氧基基]
芍藥苷(98%)C36H62O8異尿酸三縮水甘油酯
5-羥基色氨酸,5-HTPC13H12N2O.HCl溴嘧啶鹽
5-羥基色氨酸(標準品)C26H40O8右旋樟腦-10-磺酰
組C8H8O3-T 三水合物
組(標準品)C32H44N2O8溴-
卡巴拉汀C32H44N2O8.HBr2-甲基咪唑啉鹽酸鹽
卡巴拉汀(標準品)C10H12O46-甲氧基煙酸甲酯
咖啡酸C44H62O142',6'-二酮
咖啡酸(標準品)C42H64O14溴-2,6-二氟甲酸
低氧誘導因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒CD56/NCAM1 神經細胞粘附分子11 Kit
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低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒CD172a/SIRP Alpha 信號調節蛋白α100 ul
的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒CD57 CD57100 ul
蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒CD68 CD68100 ul
蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒CD68 CD6820 ul
膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒CD69/CLEC2C/AIM 活化誘導分子CD69100 ul
膽酰轉移酶(ChAT)ELISA試劑盒CD72/Ly-32 CD72蛋白20 ul
膽固酯轉移蛋白(CETP)ELISA試劑盒CD74/MHC II CD74100 ul
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