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擬態弧菌PCR檢測試劑盒廠家上海聯祖生物相關產品:人胃癌標志物 檢測試劑盒具有質量可靠、*、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 擬態弧菌PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Vibrio mimicusPCR |
貨號 | LZP7458 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Sudan I4-[(2,4-二甲氧基苯基)(Fmoc-氨基)甲基]苯氧乙酸 98% 10μg/ml,u=6~5%,酮
Sudan black BN-芴甲氧羰基-L-2,3-氨基酸 97%敵稗 分析標準品,98%
Sudan red 7BN,N'-二叔丁氧羰基-L-組氨酸 BR敵稗標準溶液 100μg/ml,u=3%
BBIHL-2,4-二氨基丁酸酸鹽 98%敵稗標準溶液 10μg/ml,u=4%
Hoechst 33342D-2,4-二氨基丁酸 99%伏殺硫磷標準溶液 10μg/ml,u=7~3%,酮
Fluorescein3,5-二-L-酪氨酸 BR伏殺硫磷標準溶液 100μg/ml,u=7~3%,酮
Fluorescein disodium salt3,5-二硝基-L-酪氨酸 98%克螨特 分析標準品,91%
DAPI乙酰氨基二酸二乙酯 98%克螨特標準溶液 100μg/ml,u=3%
Phelphthalein2-羥甲基-3,4-二氫吡喃 97%克螨特標準溶液 10μg/ml,u=4%
Phelphthalein test paperD-精氨酰胺 98%磷胺標準溶液 100μg/ml,u=4%()
PhelphthalexoneDHP HM Resin 0.5~1.1mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB磷胺標準溶液 10μg/ml,u=6%()
Thymol內皮素-1 ≥97.0% (HPLC)哌草磷 分析標準品,93%
Rhodamine 123Exendin Fragment 9-39 ≥95% (HPLC)三氯殺蟲酯標準溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:異
Rhodamine BO-[(乙氧基羰基)胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟酸鹽 98%三氯殺蟲酯標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:異
TMB艾塞那肽 97%異草胺 分析標準品,94%
3,3,5,5-Tetramethyl benzidine solution liquid-1 componentN-(反式-環氧丁二酰基)-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺 99%甲基嘧啶磷 100μg/ml,u=2%
二氯(光譜級,≥99.9%,含50-150ppm戊烯穩定劑)SEK1 (5C10) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/FITC FITC標記的小鼠抗人IgG
1,4-二氧六環(光譜純,≥99.5%)Nestin (10C2) Mouse mAbMouse Anti-human IgG/Cy7 Cy7標記的小鼠抗人IgG
1,2-二氯乙烷(for spectroscopy,≥99.8%(GC))Synaptotagmin-1 AntibodyMouse Anti-human IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的小鼠抗人IgG
N,N-二甲基乙酰胺(光譜級,≥99.8%(GC))BOB-1/OBF-1 AntibodyMouse Anti-human IgG/Cy5 Cy5標記的小鼠抗人IgG
鄰二氯苯(光譜純,99%)Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/Cy3 Cy3標記的小鼠抗人IgG
二甲基亞砜(ACS,光譜級)SGTA AntibodyMouse Anti-human IgG/Bio 生物素標記的小鼠抗人IgG
乙(光譜純,≥99.8%)ApoA1 (5F4) Mouse mAbMouse Anti-human IgG/APC APC標記的小鼠抗人IgG
乙酸乙酯(ACS 光譜級,≥99.5%)UTX (D3Q1I) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗人IgG
異辛烷(光譜純)CD79A AntibodyMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgG
乙二(光譜純 ,≥99%)CD79A AntibodyMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的小鼠抗人IgG
擬態弧菌PCR檢測試劑盒廠家CD73抗體2',5'-Dihydroxyacetophene中文名:2,5-二羥基苯乙酮別名:2,5-Dihydroxyacetophene; Quinacetophene分子式:C8H8O3
神經細胞粘附分子CALL抗體8-Glucosyl-5,7-dihydroxy-2-(1-methylpropyl)chromone中文名:別名:分子式:C19H24O9
6型膠原蛋白α5抗體Dehydroperilloxin中文名:別名:分子式:C16H16O4
接觸蛋白相關蛋白4抗體4-O-Methylgrifolic acid中文名:別名:分子式:C24H34O4
CD24抗體3,4,5-Trimethoxyphenyl-(6'-O-galloyl)-O-β-D-glucopyraside中文名:別名:分子式:C22H26O13