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爾斯布朗病毒PCR檢測試劑盒規格上海聯祖生物相關產品:人乳腺癌標志物-CA153 檢測試劑盒各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。標記的免疫測定的敏感度可提高數千倍,達ng/ml水平。在測定血清中某一物質的含量時,化學比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應測定法的敏感度約為5~10μg/ml,免疫測定中凝膠
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 爾斯布朗病毒PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱 | Wesselsbron Virus PCR |
貨號 | LZP7464 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Carbon ActivatedN-Fmoc-S-(4-甲氧基芐基)-L-半胱氨酸 98%烯效唑 分析標準品97.5%
Acid red 66Fmoc-S-叔丁基-L-半胱氨酸 98%乙烯菌核利 分析標準品,99%
m-Cresol purpleFmoc-L-谷氨酸γ芐脂 BR乙烯菌核利標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:酮
Diphenylaminesulfonic acid sodium saltN-芴甲氧羰基-D-谷氨酸 gamma-叔丁酯 98%乙烯菌核利標準溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:酮
Chicago sky blue 6BN-Fmoc-N'-三苯甲基-L-組氨酸 98%滅草猛 分析標準品,97%
MucicarmineN,N'-雙(9-芴甲氧羰基)-L-組氨酸 98%滅草猛 分析標準品
Methyl blueFmoc-L-異亮氨酸 98.5%二甲基硅油DC-200 GC,粘度~350 mPa.s, neat(25 °C)
AMCFmoc-D-亮氨酸 BR二甲基硅油DC-200 粘度~10 mPa.s, neat(25 °C)
CoumarinFmoc-(2-氯芐氧基羰基)賴氨酸 98.5%二甲基硅油DC-200 粘度~20 mPa.s, neat(25 °C)
AzophloxineFmoc-N'-三氟乙酰基-L-賴氨酸 96%二甲基硅油DC-200 粘度~50 mPa.s, neat(25 °C)
Pyrosine BFmoc-D-脯氨酸 BR二甲基硅油DC-200 粘度~100 mPa.s, neat(25 °C)
LCVFmoc-O-叔丁基-D-絲氨酸 98%二甲基硅油DC-200 粘度~200 mPa.s, neat(25 °C)
Leucomalachite GreenFmoc-O-芐基-L-絲氨酸 98%二甲基硅油DC-200 粘度~500 mPa.s, neat(25 °C)
Carbol fuchsinFMOC-O-叔丁基-L-絲氨酸 98%二甲基硅油DC-200 粘度~1000 mPa.s, neat(25 °C)
Erioglaucine disodium saltFmoc-O-三苯甲基-L-絲氨酸 98% 二甲基硅油DC-200 粘度~30000 mPa.s, neat(25 °C)
CalmagiteFmoc-O-三苯甲基-L-蘇氨酸 99%二甲基硅油DC-200 粘度~60000 mPa.s, neat(25 °C)
甲酸銨(用于質譜,≥99.0%)Cdc6 (C42F7) Rabbit mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗豚鼠IgG
苯甲(色譜級, ≥99.5%(GC))Cdc6 (C42F7) Rabbit mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗豚鼠IgG
甲基叔丁基(農殘級,≥99.9%(GC))RRM1 AntibodyMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的小鼠抗豚鼠IgG
甲基叔丁基(GC,≥99.9%(GC))LPP (8B3A11) Mouse mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的小鼠抗豚鼠IgG
二氯(農殘級,≥99.9%,,含50-150ppm戊烯穩定劑)Vimentin (5G3F10) Mouse mAbMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的小鼠抗豚鼠IgG
1,4-二氧六環(農殘級)Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyMouse Anti-Guinea pig IgG 小鼠抗豚鼠IgG
化銫(用于高通量質譜,99.9995%)Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyMouse Anti-Goat IgG/RBITC 羅丹明標記的小鼠抗羊IgG
氯苯(for HPLC, ≥99.5%)Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyMouse Anti-Goat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的小鼠抗羊IgG
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(用于GC-HS,≥99.8%(GC))RYBP AntibodyMouse Anti-Goat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的小鼠抗羊IgG
二甲基亞砜(農殘級)c-Kit AntibodyMouse Anti-Goat IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的小鼠抗羊IgG
爾斯布朗病毒PCR檢測試劑盒規格羥類固醇脫氫酶17β抗體Coronarin E中文名:別名:15,16-Epoxy-8(17),11,13(16),14-labdatetraene分子式:C20H28O
同源盒蛋白PRH抗體Scutebata B中文名:別名:分子式:C35H3910
透明質酸合成酶1抗體Adenanthin中文名:腺花素別名:分子式:C26H34O9
透明質酸結合蛋白4抗體Echiphyllin C中文名:別名:分子式:C20H293
A型流感病毒H5N1凝集素抗體Scutebata F中文名:別名:Barbatine C分子式:C30H379