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勞斯伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書上海聯祖生物相關產品:HEV-IgM檢測試劑盒堅持讓品質說話,讓細節做選擇。在ELISA中應用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度
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產品名稱 | 勞斯伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Rous Associated Virus(RAV)RTPCR |
貨號 | LZP7243 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Mesityl oxide2,6-二氟苯酸 98%4-正基乙炔 98%
Pyrimidine2,6-二氟吡啶-3-酸 95%4-正戊基苯酸 97%
3-Ami-1,2-propanediol2,5-二酸 97%1-溴-4-戊苯 97%
Salicyl alcohol2,4-二氟苯酸 98%4-甲基聯苯 98%
Deuterium oxide2,5-二氟苯酸 97%4-正戊基聯苯 99%
Luteolin2,3-二氯吡啶-4-酸 95%4-正基環己酮 99%
DEAD4-(二甲基氨基)苯酸 95%4-基-4'-戊基聯苯 98%
Dimethylphosphinic acid2,6-二氯吡啶-3-酸 95% 4-基-4'-戊氧基聯苯 98%
2,4-Pentanedione2,5-二氯吡啶-3-酸 95%4-正基苯酸 97%
Potassium Sulfide2,5-二氯吡啶-4-酸 95%4-正氧基苯酸 97%
Menthone2,6-二酸 98%4-三氟甲基硫代苯甲酰胺 98%
Ursolic acid2,4-二甲氧基嘧啶-5-酸 90%4-三氟甲氧基苯酸 98%
Cinchonidine2,4-二芐氧基嘧啶-5-酸 95% 3,4,5-三氟苯酸 97%
ACCA3-二甲氨基苯酸鹽酸鹽 98% 對酸 97%
TTA3-乙氧羰基苯酸 97%4-(三氟甲基)苯酸 98%
12-Amilauric acid2-乙氧基-1-萘酸 98%4-(反-4-基環己基)苯 98%
3-氨基-1,2,4-三唑FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-Tau protein(Thr181) 磷酸化微管相關蛋白抗體
磷酸鈉十二Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)phospho-Tau protein(Ser721) 磷酸化微管相關蛋白抗體
無磷酸氫二鈉(分子生物學級)NRF2 (D9J1B) Rat mAb (IF Specific)phospho-Tau protein(Ser422) 磷酸化微管相關蛋白抗體
菲啰,菲洛GMPS Antibodyphospho-Tau protein(Ser416) 磷酸化微管相關蛋白抗體
乙酸鈉三(分子生物學級)Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-Tau protein(Ser404) 磷酸化微管相關蛋白抗體
脫葉靈,噻苯隆Endoglin (3A9) Mouse mAbphospho-Tau protein(Ser396) 磷酸化微管相關蛋白抗體
(AR)XPA (D9U5U) Rabbit mAbphospho-Tau protein(Ser356) 磷酸化微管相關蛋白抗體
乙脫氫酶ARFGAP1 (D4C2M) Rabbit mAbphospho-Tau protein(Ser262) 磷酸化微管相關蛋白抗體
吐溫80(化學純)c-Fos (9F6) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-Tau protein(Ser235) 磷酸化微管相關蛋白抗體
吐溫80(藥用級)Phospho-Myosin IIa (Ser1943) (D7Z7T) Rabbit mAbphospho-Tau protein(Ser214) 磷酸化微管相關蛋白抗體
勞斯伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書兔子基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
兔子基質金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:50毫克
兔子基質金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100毫克
兔子基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1克
兔子甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克
兔子堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克
兔子膠原酶I(CollagenaseI)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1克
兔子膠原酶II(CollagenaseII)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1000支/盒
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。