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諾氏瘧原蟲PCR檢測試劑盒說明書上海聯祖生物相關產品:CTX檢測試劑盒產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定
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產品名稱 | 諾氏瘧原蟲PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Plasmodium knowlesiPCR |
貨號 | LZP7147 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Benzyltrimethylammonium bromide2-硝基噻吩 98%2,4,6-三氟苯酸 96%
3-(2-Amiethylami)propyldimethoxymethylsilane四溴噻吩 99%2-(三氟甲基)苯酸 97%
Polyquaternium-10噻吩-2,3-二甲 98%4-三氟甲氧基苯酸 98%
THAM鹽酸胍 分子生物學級,99.5%3-(三氟甲氧基)苯酸 98%
BIS-TRIS propane鹽酸胍 99.5%2-(三氟甲氧基)苯酸 97%
TRIS-HC1鹽酸胍 蛋白變性,99.5%2,4,5-三溴咪唑 98%
TRIS acetate salt鹽酸胍 AR,99.0%3,4,5-三氟苯酸 97%
Tris carbonate鹽酸胍 CP,98.0%2,3,4-*氧基苯酸 98%
CAPS硫酸胍 99%2-酸 98%
CAPSO聚烯酰胺 非離子型,分子量:200萬-1400萬3-酸 97%
CAPSO sodium salt2,4-二氯苯氧乙酸 97%3,4,5-*氧基苯酸 97%
CAPS Sodium salt2,4-二氯苯氧乙酸 分析標準品間三氟酸 97%
PIPES2,4-二氯苯氧乙酸標準溶液 1000mg/L,基體:甲3-乙烯基苯酸 96%
PIPES sesquisodium salt2,5-二氯苯氧乙酸標準溶液100μg/ml,溶劑:甲4-乙烯基苯酸 96%
POPSO2,4-二氯苯氧乙酸 用于植物細胞培養, ≥98%(GC)二甲苯 CP,98%(二甲苯異構體+乙基苯)
POPSO-2Na過氧化脲素 97%二苯胺 AR,99.0%
扎西他濱,2',3'-二脫氧胞苷HER3/ErbB3 (D22C5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Bio 生物素標記的兔抗小鼠IgG-Fc
玉米素核苷 PAX5 (D7H5X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/APC APC標記的兔抗小鼠IgG-Fc
齊留通PAX5 (D7H5X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗小鼠IgG-Fc
齊留通(標準品)MERIT40 (D7Y5K) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗小鼠IgG-Fc
依諾沙星(溶性)Phospho-TPOR (Tyr626) (D3H7B) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠IgG-Fc
氧氟沙星uPAR (D7X2N) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗小鼠IgG-Fc
氧氟沙星(標準品)Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗小鼠IgG-Fc
阿巴卡韋 Phospho-CaMKII (Thr286) (D21E4) Rabbit mAbRabbit anti-mouse IgG-Fc fragment whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc段抗血清
阿巴卡韋 (標準品)Phospho-CaMKII (Thr286) (D21E4) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc 兔抗小鼠IgG-Fc
煙酰胺/尼克酰胺/維生素B3Toll-like Receptor 6 (D1Z8B) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/RBITC 羅丹明標記的兔抗小鼠IgG
諾氏瘧原蟲PCR檢測試劑盒說明書人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1克
人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500毫克
人葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1克
人葡萄糖轉運蛋白3(GLUT3)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃150毫克
人普通急性淋巴細胞白血病抗原(CALLA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
人前白蛋白(PA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人前病毒整合位點1(Pim1)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人前列環素(PGI)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。