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皮里陶病毒PCR檢測試劑盒說明書上海聯祖生物相關產品:LDL檢測試劑盒應取10μl樣品進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 皮里陶病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Pirital virus(PIRV)RTPCR |
貨號 | LZP7143 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Cetyl pyridinium HC1鎘 99.999%,granular2.6-二氯苯酸 95%
Hexadecylpyridinium bromide碲化鎘 99.999%,5N2.6-二氟-4-甲氧基苯酸 95%
Hexadecylpyridinium chloride碲化鎘 99.9999%,6N2,5-二甲基-2,4-己二烯 97%,含60-100ppm BHT穩定劑
STAB銦 99.999%2,3-二酸 97%
OTAC銦 SP2,5-二酸 97%
TTAB鉛 flakes,SP3,5-二酸 97%
TTAC鉛 99.99%,powder2,5-二甲氧基苯酸 98%
DTAC鉛 99.999%,粒狀,1-3mm2,3-二氟苯酸 98%
DTAB質鉛標樣 1.0mg/l,分析標準品2,4-二氟苯酸 98%
SLS高純硫 99.99% metals basis2,5-二氟苯酸 97%
Sodium dodecanesulfonate高純硫 99.999% metals basis2,5-二氯苯酸 98%
Sodium dodecylbenzenesulfonate高純硫 分析標準品3,4-二甲氧基苯酸 97%
EDDAB硒粉 99.9% metals basis,200目2,3-二氯吡啶-4-酸 95%
Tween 20硒粉 ≥99.99% metals basis,200目2,4-二酸 97%
Tween 40硒粉 ≥99.999% metals basis,-100mesh,powder3-乙氧羰基苯酸 97%
Tween 60硒 ≥99.9999% metals basis,Powder4-乙氧羰基苯酸 97%
鹽酸舍曲林(標準品)FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAbRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠k鏈
7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN-38)FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAbRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗小鼠k鏈
戊酸鈉THOC4/ALY (D3R4R) Rabbit mAbRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗小鼠k鏈
戊酸鈉(標準品)Smad 1/5/9 Antibody Sampler KitRabbit anti-mouse Kappa light chain 兔抗小鼠k鏈
司帕沙星Plasmigen AntibodyRabbit anti-mouse Kappa Chain whole serum 兔抗小鼠k-鏈抗血清
司帕沙星(標準品)VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)Rabbit Anti-mouse IgM/RBITC 羅丹明標記的兔抗小鼠IgM
氟喹酮c-Rel (D5G1A) Rabbit mAb (ChIP Formulated)Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標記的兔抗小鼠IgM
氟喹酮(標準品)CABIN1 (D2B9F) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗小鼠IgM
磺胺醋酰鈉 SA-NAIL-17RA (D1Y4C) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗小鼠IgM
磺胺醋酰鈉 SA-NA(標準品)Phospho-CAD (Ser1859) AntibodyRabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗小鼠IgM
皮里陶病毒PCR檢測試劑盒說明書人凝血酶受體(TR)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT250克
人凝血酶血栓調節蛋白復合物(T-TM)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:250毫克
人凝血酶原(PT)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃200毫升
人凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA *shēng huà shì jì 容量:100克
人凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃100KU
人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃5克
人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
人凝血因子Ⅷ相關抗原(Ⅷ-Ag)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克