注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Boc-D-valine小鼠腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基丁二酸 AR,99.5%

Z-L-Alanine小鼠腎小管上皮細胞*培養(yǎng)基丁二酸 GCS，≥99.5% (T)

Z-D-alanine小鼠腎小球內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基丁二酸 CP,99.0%

Z-Gln-OH小鼠前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基腐植酸 黃腐酸FA ≥90％

Z-Asn-OH小鼠腎上皮細胞*培養(yǎng)基己酸二乙氨基乙酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品

CBZ-L-Phe小鼠膀胱成纖維細胞*培養(yǎng)基絨毛膜促性激素 ~5,000-7000  I.U. per mg

Z-D-Phe-OH小鼠腎足突細胞*培養(yǎng)基促性腺素 來源于絕經(jīng)期婦女尿液 >200 I.U. per mg

Z-Glu-OH小鼠腎小管平滑肌細胞*培養(yǎng)基肝素鈉 185 USP units/mg

CBZ-D-Glu小鼠腎成纖維細胞*培養(yǎng)基4-叔丁基苯甲酸 99%

Z-L-aspartic acid小鼠表皮角化細胞*培養(yǎng)基環(huán)基溴 99%

N-Cbz-D-aspartic Acid小鼠成纖維細胞*培養(yǎng)基環(huán)基溴 98%

CBZ-L-Arg小鼠軟骨細胞*培養(yǎng)基對叔丁基苯甲酸甲酯 99%

Z-DL-phenylalanine小鼠破骨細胞*培養(yǎng)基對氨基苯乙酮 99%

N-Z-S-phenyl-L-cysteine小鼠皮膚肥大細胞*培養(yǎng)基4-羥基二苯甲酮 98%

CBZ-L-Gly小鼠前脂肪細胞*培養(yǎng)基2-巰基-1-甲基咪唑 98%

N-Cbz-Hydroxy-L-proline小鼠成骨細胞*培養(yǎng)基環(huán)己胺鹽酸鹽 電子級

甲氨蝶呤C-fos(i mmediate early gene, ieg)  即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原SSTR1  生長抑素受體1抗體

甲氨蝶呤（標(biāo)準(zhǔn)品）C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun：active protein 1)  原癌基因蛋白（活化蛋白1）（抗原）SSEA3  階段特異性胚胎表面抗原-3抗體

尼美舒利cyclin D1  周期素D1（抗原）SSDD/Steroid sulfatase  類固硫酸酯酶抗體

硝酸咪康唑Beta-casein( Beta-casein)  β-酪蛋白(抗原)SSBP2  抑癌基因SSDP2抗體

硝酸咪康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)CCK8 (Cholecystokinin-8)  膽囊收縮素/縮膽囊素(八肽)SSB/La  干燥癥SSB/La抗體

硫酸小諾霉素/硫酸小諾米星/硫酸沙加霉素CD3 epsilon peptide  CD3 epsilon(抗原)SSA/52KDa Ro  核糖核蛋白抗原抗體

小諾霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）CD4  CD4(抗原)SRXN1  硫氧還蛋白1抗體

MUG;4-甲基傘型酮-beta-D-葡糖苷酸CD4(Rabbit Anti-Human Mouse rat CD4 Palyclonal Anti-body)  CD4抗原SRRM4  絲氨酸/精氨酸相關(guān)核基質(zhì)蛋白4抗體

米諾地爾CD8  CD8抗原SRRM3  絲氨酸/精氨酸相關(guān)核基質(zhì)蛋白3抗體

米諾地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)CD20(抗原)  CD20（抗原）SRRM2  絲氨酸/精氨酸相關(guān)核基質(zhì)蛋白2抗體
巴西諾卡菌PCR檢測試劑盒價格人端粒酶(TE)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

人對氨基苯甲酸(PABA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

人對氧磷酶(PON)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人多巴(DA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人多巴D1受體(D1R)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人多巴D2受體(D2R)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃，避光1克

人多巴-β羥化酶(DBH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人多巴脫羧酶(DDC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。