注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
人胚肺成纖維細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-EMX1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞周期蛋白 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物  

大鼠支氣管上皮細(xì)胞報(bào)價(jià)Anti-EMB Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 生長(zhǎng)因子和激素 糖尿病  

大鼠腸巨噬細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-ENAH Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 合成與降解 細(xì)胞類(lèi)型標(biāo)志物 脂蛋白 新陳代謝 鋅指蛋白  

大鼠卵巢上皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-EMX2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

大鼠滑膜細(xì)胞說(shuō)明書(shū)Anti-E2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長(zhǎng)因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

小鼠外周血白細(xì)胞價(jià)格Anti-ENPP3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 結(jié)合蛋白 表觀(guān)遺傳學(xué)  

小鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞價(jià)格Anti-ENTPD1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號(hào)  

小鼠成纖維細(xì)胞價(jià)格Anti-ENTPD1 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞外基質(zhì)  

小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞報(bào)價(jià)Anti-EOMES Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 干細(xì)胞 表觀(guān)遺傳學(xué)  

小鼠皮下脂肪細(xì)胞價(jià)格Anti-EPG5 Antibody蛋白分子量  predicted molecular weight: 50kDa

?CCRF-CEM（人急性淋巴白血病細(xì)胞）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-EPGN Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶  

RF/6A（猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞）價(jià)格Anti-EPB41L2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué)  

SK-N-SH（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）報(bào)價(jià)Anti-EPHB4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

A2（人腺樣囊性癌細(xì)胞）價(jià)格Anti-EPHA6 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

LS 180（人結(jié)腸腺癌細(xì)胞）價(jià)格Anti-EPHB2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

2,4-二苯磺酰  1-辛烯-3-醇  4-溴-2-苯胺

間二  糠(基)硫醇  4-溴鄰二

5-溴-3--7-氮雜吲哚  反,順-2,6-壬二烯-1-醇  2-溴聯(lián)苯

2-溴-4-苯基乙酰苯  乙基芳樟醇  2-溴-5-甲氧基

NA  硼酸鹽助熔劑(67:33 )

Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylami)-phosphonium hexafluorophosphate  卡特縮合劑  56602-33-6

6201 Pink diatomite  6201擔(dān)體

Congo red paper  剛果紅試紙

大鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA試劑盒 ，英文名： FAS ELISA Kit

人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA檢測(cè)試劑盒humanai-neuophilcytoplasmicaibody,cANCAELISAKit 96T/48T

大鼠表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)免疫試劑盒 Rat epidermal growth factor receptor,EGFR ELISA kit

CLIAKitfoIMP-2(Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase2)ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2規(guī)格：48T/96T

全組織茜素紅(ALIZARIEDS)鈣染色試劑盒10次

ELISAKitABAb人抗腦組織抗體規(guī)格：48T/96T
馬皰疹病毒型PCR檢測(cè)試劑盒廠(chǎng)家小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse plaet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA Kit*

小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse Plaet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA Kit *

小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse Plaet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Mouse plaet factor 3, PF3 ELISA Kit*

小鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit *

小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody,OLAb ELISA Kit*

小鼠氧化型谷胱甘肽(GSGS)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Mouse oxidizided glutathione,GSGS ELISA Kit進(jìn)口/分裝
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。