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產品名稱 | 麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱 | Carnobacterium maltaromaticumPCR |
貨號 | LZP6552 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
1,6-二磷酸果糖二鈣鹽價格Anti-PPP1R14A Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
海藻酸鈣保存Anti-PPP1R1B Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 線粒體
正磷酸〖鐵〗二物使用說明書Anti-PPP2CA Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
4-甲基傘形酮酰-β-D-吡喃葡糖酸苷保存Anti-PRAME Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
甜菊糖價格Anti-PPP3CA Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
羧化殼聚糖價格Anti-PPP2CA Antibody(原貨號PB0362)研究領域 細胞生物 免疫學
甜菜堿鹽酸鹽保存Anti-PPT1 Antibody(原貨號PB0831)研究領域 細胞生物 免疫學
7-羥基-4-甲基實驗步驟Anti-PRDM1 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
2-萘氧乙酸鈉保存Anti-PRC1 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
3-吲哚丁酸鉀實驗步驟Anti-PRDM5 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
5-溴-2-脫氧尿苷實驗步驟Anti-PRDX1 Antibody(原貨號PB0348)研究領域 細胞生物 免疫學
無膽酸保存Anti-PRDX2 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
脫氧鵝膽酸使用說明書Anti-PRDX3 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 信號轉導 新陳代謝
乳酸菌選擇性瓊脂價格Anti-PRDX4 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學
檸檬酸價格Anti-PRDX4 Antibody(原貨號PB0416)研究領域 細胞生物 免疫學
流錳Manganese SulfateAR500g
DL004-25G2,4-dinitfluorobenzene 2,4-二硝基扶本 8-34-825g97
P8471-25GPectin 果膠9000-69-525g
TMB顯色試劑盒(組化或膜HRP顯色用)100ml
Niacinamide100g
銅粉Copper powder5N50g
硼酸Boric acid4N25g
流銨Ammonium sulfate4N10g
二甲亞砜Dimetxyl sulfoxide色固25ml
鋅粒Zinc tablets5N25g
大鼠胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人新喋呤(NEOP)免疫試劑盒 Human neopterin,NEOP ELISA kit
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
Ratmajorbasicprotein,MBPELISA試劑盒大鼠主要堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanHeatShockProtein70,HSP-70ELISA試劑盒人熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Humanleukoregulin,LRELISAKit人白細胞調節素(LR)ELISA試劑盒規格:96T/48T
麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒規格人抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒 英文名稱:Human anti-centrol and centrosome antibody,ACA ELISA Kit進口/原裝
人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)ELISA試劑盒英文名稱:human anti-neutrophil cytoplasmic antibody,cANCA ELISA Kit進口/原裝
人抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒英文名稱:Human Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody,pANCA ELISA Kit進口/分裝
人抗中性粒細胞抗體(ANA)ELISA試劑盒 英文名稱:Human anti-neutrophil antibody,ANA ELISA Kit進口/原裝
人抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)ELISA試劑盒英文名稱:Human anti-neutrophil granules antibody,ANGA ELISA Kit*
人抗滋養膜細胞抗體(ATA)ELISA試劑盒英文名稱:Human anti-trophoblast antibody,ATA ELISA Kit進口/原裝
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。