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禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒規格上海聯祖生物相關產品:TSH檢測試劑盒用于多管發酵法測定大腸菌群的確證試驗煌綠乳糖膽鹽肉湯顆粒培養基1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度
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產品名稱 | 禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱 | Avian Sarcoma Virus(ASV)RTPCR |
貨號 | LZP6412 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人CXC趨化因子受體3(CXCR3)elisa試劑盒Anti-DDB1 Antibody(原貨號PB0607)研究領域 腫瘤 細胞生物 信號轉導 干細胞
人CCAAT增強子結合蛋白α(C/EBPα)elisa試劑盒Anti-DDB2 Antibody研究領域 細胞生物 信號轉導 細胞膜受體 G蛋白偶聯受體 G蛋白信號
人Apelin elisa試劑盒Anti-DDIT3 Antibody研究領域 心血管 細胞生物 細胞粘附分子
人5'-AMP活化蛋白激酶α-2催化亞基(PRKAA2)elisa試劑盒Anti-DDB2 Antibody研究領域 細胞生物 神經生物學 信號轉導
人Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)elisa試劑盒Anti-DDR1 Antibody研究領域 細胞生物 神經生物學 信號轉導
人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)elisa試劑盒Anti-DDR1 Antibody研究領域 細胞生物 信號轉導 細胞粘附分子
人26S蛋白酶體非ATP酶調節亞基11(PSMD11)elisa試劑盒Anti-DDR2 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 信號轉導 激酶和磷酸酶 新陳代謝
人17-酮類固醇(17-KS)elisa試劑盒Anti-DDT Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 信號轉導 激酶和磷酸酶 新陳代謝
人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)elisa試劑盒Anti-DDR2 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 神經生物學 信號轉導 G蛋白偶聯受體 新陳代謝 G蛋白信號
人1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)elisa試劑盒Anti-DDT Antibody研究領域 神經生物學 細胞膜受體 G蛋白偶聯受體 G蛋白信號
牛褪黑素(MT)elisa試劑盒Anti-DDT Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 生長因子和激素
雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)elisa試劑盒Anti-DDX4 Antibody研究領域 細胞生物 信號轉導 G蛋白偶聯受體 G蛋白信號
大鼠可溶性白介素-2 受體(sIL-2R)elisa試劑盒Anti-DDX3X Antibody研究領域 細胞生物 神經生物學 信號轉導 轉運蛋白 表觀遺傳學
大鼠可溶性CD23(sCD23)elisa試劑盒Anti-DDX1 Antibody研究領域 細胞生物 神經生物學
大鼠顆粒酶B(Gzms-B)elisa試劑盒Anti-DDX4 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 信號轉導 新陳代謝 表觀遺傳學
尿素酶瓊脂基礎250g生化培養基,細菌脲酶檢測(GB、SN標準)
Mediaforisolationofmagnetotacticbacteria
乳糖蛋白胨培養液 Lactose Peptone Broth 250 飲用水,水源水中總大腸菌群的測定(GB標準)
HB培養基250g/瓶植物組織培養incubationmediaHB培養基250g/瓶植物組織培養
FB1(Half-Fraser)添加劑(A、B) 2ml/支*40 每支添加到225ml HBJ006中
3.5% NaC1甘露醇發酵管 3.5% NaC1甘露醇發酵管 20支 BR
1% NaC1纖維二糖發酵管 1% NaC1纖維二糖發酵管 20支 BR
1% NaC1甘露糖發酵管 1% NaC1甘露糖發酵管 20支 BR
3.5% NaC1葡萄糖磷酸鹽胨水發酵管 3.5% NaC1葡萄糖磷酸鹽胨水發酵管 20支 BR
禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒規格兔外根鞘細胞5 x 10^5 cells/T25培養瓶
兔胃成纖維細胞5 x 10^5 cells/T25培養瓶
兔胃黏膜上皮細胞5 x 10^5 cells/T25培養瓶
兔胃平滑肌細胞5 x 10^5 cells/T25培養瓶
兔纖維環細胞5 x 10^5 cells/T25培養瓶
兔小腸成纖維細胞5 x 10^5 cells/T25培養瓶
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。